FlowJo 7.6.5 下载

FlowJo是一款功能强大的流式细胞分析软件，它能够兼容几乎所有流式细胞仪收集的数据信息。FlowJo操作简便，功能全面，帮助用户轻松掌握细胞状态的变化。它拥有先进的流动室和流液驱动系统、光电转换器和数据处理系统等高科技设备。

软件功能：

单标样版

单标样版数据信息常见的动态显示是单参数条形图。一般横坐标轴可以是线性平均误差或多数平均误差，代表着所检验的莹光或透射光的强度；纵坐标表明的是横坐标轴某一特定莹光强度的细胞数，有时候也用相对性百分数来表现。以3 color comp 文件夹名称中的CyPE comp.fcs开展分析示例。将此文件夹名称挪到桌面上，并把该数据信息文件夹名称从桌面上拖进Flowjo中的组室内空间中。在组室内空间中点击选定“3 color comp”组，这时在样本空间里显示信息“3 color comp”组里的全部样版。然后在样本空间中双击鼠标“Cy5PE comp.fcs”，出现图型对话框。此为二维点图，X轴选择SSC（侧面透射，细胞内顆粒构造越复杂，质量越大，SSC越大，相反越小。）Y轴选择FSC（前向透射，细胞越大，FSC越大；相反越小。）选择设门工具（矩形框门、椭圆形门、不规则图形门、感应门）中的任意一个，在二维点图中选定淋巴结细胞。在图型对话框中双击鼠标选定的淋巴结细胞，形成新的图型对话框。在X轴选择Cy5PE:CD4，Y轴选择Histogram，选择设门工具（地区门、双分门）中任意一个，在单参数条形图中设门。

多色标卡样版

多色标识样版，包括双标识、三标识及之上的样版。横坐标轴和纵坐标各自代表与细胞相关的2个独立参数，平面图上的每一个点代表具有相对平面坐标的细胞。以三标识样版为例子，选择3-color-experiment文件夹名称中的931115-B02-Sample01.FCS开展分析示例。同样在样本空间中双击鼠标“931115-B02-Sample01.FCS”样版，出现图型对话框，显示为二维点图。X轴选择FSC，Y轴选择SSC。随后选择不规则图形设门工具，在二维点图中选定淋巴结细胞。双击鼠标淋巴结细胞门，出现图型对话框，X轴选择Fluor::CD3，Y轴选择FSC。应用矩形框设门工具选定CD3阳性细胞，设门并命名为T细胞。 双击鼠标T细胞门，出现图型对话框，在X轴选择Cy5PE::CD4，Y轴选择PhyEry::CD8，应用十字门工具设门（拖拽鼠标将四分门挪到目标位置就可以，一般依据细胞分群的发展趋势，四分门的定义线可建在阴性、阳性细胞的分群处），如下图所显示：

Q1：CD8单阳性细胞，为CD8 T细胞

Q2：双阳性细胞

Q3：CD4单阳性细胞，为CD4 T细胞

Q4：双阴性细胞

细胞凋亡（Cell apoptosis）

拖进细胞凋亡样版，双击鼠标原始记录开启图型对话框。X轴选择FSC-A，Y轴选择SSC-A。分析细胞凋亡的细胞选择图中所显示的细胞人群开展分析。细胞残片未予分析。 在SSC/FSC图上双击鼠标“分析的细胞人群”，X轴选择FITC, 用于表明AnnexinV-FITC。Y轴选择PE-Texas, 用于表明PI。用四分门设门工具定义活细胞和细胞凋亡细胞。如下图所显示：

Q1：(AnnexinV-FITC)-/PI ，此区域的细胞为萎缩细胞。也很有可能有极少数的末期细胞凋亡细胞在其中，甚至机械损伤的细胞也包括在其中。

Q2: (AnnexinV FITC) /PI ，此区域的细胞为末期细胞凋亡细胞。

Q3：(AnnexinV-FITC) /PI-，此区域的细胞为初期细胞凋亡细胞。

Q4：(AnnexinV-FITC)-/PI-，此区域的细胞为活细胞。一般统计分析细胞凋亡率时选用Q2 Q3，末期细胞凋亡+初期细胞凋亡群（即全部AnnexinV阳性群）。

细胞周期时间（Cell Cycle）

细胞周期的检验是流式细胞仪更为普遍的应用之一。细胞周期时间就是指以有丝分裂方法繁殖的细胞从等位基因瓦解完毕到子细胞瓦解完毕所历经的全过程。一般由G1期、S期、G2期和M期构成。细胞在G1期进行必需的生长发育和物质准备，在S期进行性染色体DNA的复制，在G2期开展必需的检查恢复，以确保DNA复制的准确性。在M期进行遗传到子细胞中的平等分配，使细胞开展分裂。细胞周期时间检测中PI更为常见。PI为插入性核苷酸荧光染料，能选择性的插入核苷酸DNA和RNA发夹结构螺旋式的碱基中间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪开展分析，就可以获得细胞周期时间每个环节的DNA分布情况，进而计算出每个期的百分之成分。 以cell cycle 文件夹名称中的5206.001，PI标识为例子，设门选择目标细胞人群，将细胞残片清除在外面。即双击鼠标操作台中的5206.001样版，开启图型对话框。X轴选择FSC-H，Y轴选择SSC-H，细胞残片位于左下方的位置，设门选定目标细胞，如下图： 设门选定要开展细胞周期时间分析的单细胞人群，清除粘连细胞（粘连在一起的双细胞或多细胞低回声区等）的危害。X轴选择FL2-W(width)，Y轴选择FL2-A(area)，设门方法如下图：BD的流式细胞仪收集的数据信息：在开展周期时间分析的情况下，一般是选用FL2-A与FL2-W（或是FL2-A与FL2H）开展设门。 Beckman的流式细胞仪收集的数据信息：X轴选择FL3-LIN, 用于表明PI的线性信号。Y轴选择FL3-PEAK, 用于表明PI的最高值信号。设门方法如下图：在FlowJo操作台中选定“单细胞人群”这一节点，在工具栏的“工具”中选择“细胞周期时间”，开启周期时间分析对话框。获得G1期、S期、G2期细胞百分数，G1期CV值和G2期CV值等数据信息。图上粉红色的曲线图是周期时间线性拟合的模型曲线图，灰黑色的为样本曲线图。理想化情况是粉红色和灰黑色曲线图符合一致为最好。线性拟合的好坏可以依据右侧的RMS值来分辨。RMS(root mean square error)值越低越好，当周期时间线性拟合的不好的情况下，可以根据更换拟合模型（Watson和Dean-Jett-Fox）或是变更限定标准保证 （G1是G2的二倍）进行调节。而G1/S/G2百分数：G1/S/G2期细胞所占的百分数。G1/G2均值：G1/G2期细胞莹光强度的平均值。CV（Coefficient of Variation，变异系数）：仪器设备因素和试品制取及上色过程对样本采集的人为因素影响。一般G0/G1峰的CV来检验分辨率或精确度。G1 cv/G2 cv：G1/G2峰的变异系数，其大小体现了G1/G2峰的宽度，数值越小，峰越窄。FlowJo 解决流式的数据信息简单易学，并且TOP10 免疫学刊物上的文章内容大部分全是用 FlowJo 分析数据。应用好FlowJo对发表高分数文章发表有非常大的帮助。